PCOS

摘要

目的

探讨多囊卵巢综合征（PCOS）患者血清微小核糖核酸-206（miR-206）表达及其与下丘脑-垂体-性腺轴内分泌的关系。

方法

选取2020年3月至2022年12月许昌市人民医院收治的148例PCOS患者设为研究组，另同期选取133例月经正常的健康体检未孕女性设为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测所有受试者血清miR-206表达，另采用化学发光免疫分析法检测血清促卵泡激素（FSH）、促黄体生成素（LH）、雌二醇（E₂）、睾酮（T）、泌乳素（PRL）、孕酮（P）水平。采用Pearson相关系数分析PCOS患者血清miR-206表达与FSH、LH、E₂、T、PRL、P的关系。

结果

研究组血清miR-206表达（0.38±0.07）明显低于对照组（0.95±0.12）（P<0.05）；研究组血清FSH、P水平［（5.12±1.19）mIU/mL、（1.52±0.44）nmol/L］均明显低于对照组［（6.58±1.34）mIU/mL、（2.49±0.62）nmol/L］，血清LH、E₂、T、PRL水平［（10.96±2.24）mIU/mL、（78.63±22.49）pg/mL、（0.88±0.23）ng/mL、（21.46±5.32）ng/mL］均明显高于对照组［（6.73±1.85）mIU/mL、（49.41±10.65）pg/mL、（0.51±0.12）ng/mL、（16.35±3.21）ng/mL］，差异有统计学意义（P<0.05）；经Pearson相关系数分析，PCOS患者血清miR-206表达与LH、E₂、T、PRL水平均呈负相关性（r=-0.546、-0.501、-0.533、-0.485，P<0.05），与FSH、P水平均呈正相关性（r=0.493、0.528，P<0.05）。

结论

PCOS患者血清miR-206表达明显降低，其与下丘脑-垂体-性腺轴内分泌相关指标存在一定的相关性。

关键词

多囊卵巢综合征; 微小核糖核酸-206; 下丘脑-垂体-性腺轴; 相关性

多囊卵巢综合征（PCOS）是影响育龄期女性生殖健康的常见疾病之一，主要由内分泌系统紊乱与代谢紊乱引发，导致患者出现月经不调、闭经甚至或不孕等^［1］。下丘脑-垂体-性腺轴对生殖发挥着重要的调控作用，通过调节促性腺素释放激素、促卵泡激素（FSH）、促黄体生成素（LH）的分泌，影响卵泡发育、雌激素释放与排卵等，最终影响女性月经周期与生育，下丘脑-垂体-性腺轴内分泌功能失调是PCOS发病的重要病理机制^［2］。胰岛素抵抗是影响PCOS发病的另一公认的生理病理特征，可促进PCOS患者病情进展^［3］。近年来，微小核糖核酸（miRNA）在临床多种疾病诊治中的作用逐渐被探索与发现，且已有研究^［4-5］表明miRNA与胰岛素抵抗、PCOS发病存在密切关系。微小核糖核酸-206（miR-206）为miRNA家族重要成员，有研究^［6］表明，miR-206可通过促进胰岛素受体的磷酸化而促进胰岛素信号传导，抑制葡萄糖生成；另有研究^［7］报道，miR-206可能通过调节卵巢颗粒细胞生存与凋亡而在PCOS中起着重要作用。但关于PCOS患者血清miR-206表达与下丘脑-垂体-性腺轴内分泌的关系尚需进一步深入探索、揭示，鉴于此，本研究旨在通过探讨二者间的关系，以为临床治疗提供新思路，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取许昌市人民医院2020年3月至2022年12月收治的148例PCOS患者设为研究组，另同期选取年龄、体质量指数与之相匹配的133例月经正常的健康体检未孕女性设为对照组。纳入标准：①研究组均符合相关指南^［8］中PCOS诊断标准，且为初诊患者；②对照组月经正常；③年龄20~40岁；④受试者均知情同意。排除标准：①伴有垂体瘤、腺垂体功能减退、甲状腺/甲状旁腺疾病、库欣综合症、先天性肾上腺皮质增生、性腺发育不全、醛固酮增多症、高泌乳素血症、卵巢早衰等其他内分泌疾病；②伴有心肝肾等脏器严重疾病；③伴有肿瘤疾病；④伴有自身免疫性疾病；⑤近6个月内使用过激素类药物治疗；⑥伴有感染性疾病；⑦有酗酒、药物滥用史；⑧妊娠期、哺乳期女性。

本研究已获得医院伦理委员会审批，受试者均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 血清miR-206表达检测

月经规律者于月经第5天，月经无规律或闭经者于B超检查未发现优势卵泡时，采集受试者晨起空腹肘静脉5 mL，离心10 min（3 000 r/min、半径10 cm），提取血清，放于-20℃冰箱保存待检。采用Trizol法［爱必信（上海）生物科技有限公司］提取所有受试者血清总RNA，以紫外分光光度计鉴定其纯度、完整性，使用miRNeasy提取分离试剂盒（Qiagen公司）提取miRNA。采用miRNA Reverse Transcription Kit反转录试剂盒（上海慧颖生物科技有限公司）逆转录合成cDNA，按照SYBR PrimeScript RT-PCR Kit试剂盒（上海易汇生物科技有限公司）说明书进行实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）操作，miR-206引物序列：上游5´-ATCCAGTGCGTGTCGTG-3´，下游5´-TGCTTGGAATGTAAGGAAG-3´；内参U6引物序列：上游5´-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3´，下游5´-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT。反应总体积25 μL，其中cDNA为1.0 μL，SYBR Primix Ex Taq TM为10 μL，Primer为0.8 μL，RNase H₂O为13.2 μL。反应条件：95℃预变性5 min，95℃变性15 s，60℃ 30 s，72℃延伸10 s，总共40个循环。以2^-ΔΔct计算miR-206表达。

1.2.2 血清性激素水平检测

采用化学发光免疫分析法检测血清FSH、LH、雌二醇（E₂）、睾酮（T）、泌乳素（PRL）、孕酮（P）水平，全自动化学发光免疫分析仪购自北京贝尔生物工程股份有限公司，相关试剂盒购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司。

1.3 观察指标

①研究组、对照组血清miR-206表达。②研究组、对照组血清FSH、LH、E₂、T、PRL、P水平。③分析PCOS患者血清表达与FSH、LH、E₂、T、PRL、P的关系。

1.4 统计学方法

采用SPSS 24.0软件进行统计学分析。经正态性检验，年龄、体质量指数、血压、血清各指标等计量资料均符合正态分布，以均数±标准差（$\overline{x}\pm s$）表示，采用$t$检验；计数资料如生育史以百分率（%）表示，采用χ²检验；血清miR-206表达与性激素水平的关系采用Pearson相关系数分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较

研究组年龄、体质量指数、血压、有生育史情况与对照组比较，差异均无统计学意义（P>0.05），见表1。

表1  两组一般资料比较

组别	$n$	年龄/($\overline{x}\pm s$, 岁)	体质量指数/($\overline{x}\pm s$, kg/m2)	收缩压/($\overline{x}\pm s$, mmHg)	舒张压/($\overline{x}\pm s$, mmHg)	有生育史[n(%)]
研究组	148	30.25±4.28	24.45±3.19	114.36±11.38	78.92±8.63	62(41.89)
对照组	133	29.87±4.33	23.97±3.06	113.62±11.25	78.24±8.76	66(49.62)
t/$\chi$2		0.739	1.284	0.547	0.655	1.689
P		0.461	0.200	0.585	0.513	0.194

2.2 两组血清miR-206表达比较

研究组血清miR-206表达平均为0.38±0.07，对照组平均为0.95±0.12，研究组血清miR-206表达明显低于对照组，差异有统计学意义（$t$=49.220, P<0.001）。

2.3 两组血清性激素水平比较

研究组血清FSH、P水平均明显低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），血清LH、E₂、T、PRL水平均明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

表2  两组血清性激素水平比较 （$\overline{x}\pm s$）

组别	n	FSH/(mIU/mL)	LH/(mIU/mL)	E2/(pg/mL)	T/(ng/mL)	PRL/(ng/mL)	P/(nmol/L)
研究组	148	5.12±1.19	10.96±2.24	78.63±22.49	0.88±0.23	21.46±5.32	1.52±0.44
对照组	133	6.58±1.34	6.73±1.85	49.41±10.65	0.51±0.12	16.35±3.21	2.49±0.62
$t$		9.674	17.147	13.668	16.628	9.615	15.238
P		0.000	0.000	0.000	0.000	0.000	0.000

2.4 PCOS患者血清miR-206表达与性激素水平的关系

经Pearson相关系数分析，PCOS患者血清miR-206表达与LH、E₂、T、PRL水平均呈负相关性（$r$=-0.546、$r$=-0.501、$r$=-0.533、$r$=-0.485, P<0.001、P<0.001、P<0.001、P=0.001），与FSH、P水平均呈正相关性（$r$=0.493、$r$=0.528, P=0.001、P<0.001），见图1。

A  

B  

图1  PCOS患者血清miR-206表达与性激素水平的关系散点图

C  

D  

  

  

  

  E F

注：A：血清miR-206表达与FSH的关系；B：血清miR-206表达与LH的关系；C：血清miR-206表达与E₂的关系；D：血清miR-206表达与T的关系；E：血清miR-206表达与PRL的关系；F：血清miR-206表达与P的关系。

续图1　PCOS患者血清miR-206表达与性激素水平的关系散点图

3 讨论

PCOS是内分泌科常见病，发生与遗传、环境等因素有关，调查显示，我国育龄期妇女PCOS患病率可高达10%^［9］，并呈逐渐上升趋势。PCOS对女性身心健康可造成严重损害，及早对患者病情进行准确评估、为其制定合适的个体化治疗方案，对促进其预后改善意义重大。调节内分泌激素水平、降低胰岛素抵抗等是临床治疗PCOS患者的重要干预途径，而探寻影响内分泌或胰岛素抵抗等的相关因素、寻找相关分子靶点对指导临床治疗具有积极意义。

miRNA属于非编码单链RNA，在胚胎发育、调节细胞增殖/分化/凋亡、调控免疫功能等生物过程中具有举足轻重的作用，其在血清中稳定、易于检测，目前已被证实可作为多种疾病诊断的特异性生物标志物与治疗靶点^［10-12］。miR206位于人类染色体6p12.2上，参与机体多种重要生理学过程。miR-206可通过调节胰岛素信号传导、葡萄糖激酶活性，抑制葡萄糖转运蛋白表达，减少葡萄糖产生^［13］，同时其可调节人类卵巢颗粒细胞增殖与凋亡^［14］。本研究中显示，研究组血清miR-206表达较对照组明显降低，提示PCOS患者血清miR-206表达明显下降。分析原因可能为，当血清miR-206表达明显下降时，则其调节胰岛素信号传导、卵巢颗粒细胞增殖与凋亡的作用减弱，引起颗粒细胞功能失调，对卵巢激素分泌和卵泡发育等产生影响，从而参与PCOS的发病过程。白爱红等^［15］研究指出，PCOS患者血清miR-206表达明显低于月经规律健康女性，本研究结果与此相一致，共同表明血清miR-206低表达可能参与了PCOS发生发展。

另本研究中，研究组血清FSH、P水平均明显低于对照组，而血清LH、E₂、T、PRL水平均明显高于对照组，提示PCOS患者存在下丘脑-垂体-性腺轴内分泌紊乱。高雄激素血症是PCOS患者重要临床特征之一，血清T水平明显升高，其可正反馈作用于下丘脑-垂体，诱导LH分泌过多，FSH处于正常状态或分泌减少；而持续高水平LH又可促使卵泡膜细胞、间质细胞增生，进而导致雄激素合成增多，过多的雄激素通过芳香化作用可转化生成雌激素，导致E₂水平升高，且高水平雄激素可持续刺激垂体而促使PRL分泌增多。此外，胰岛素抵抗是PCOS患者另一常见特征，此可引起雄激素水平升高、P水平降低等。黄立等^［16］研究报道，PCOS患者血清T、E₂、LH水平明显高于健康体检妇女，本研究结果与此相符合。本研究还发现，PCOS患者血清miR-206表达与LH、E₂、T、PRL水平均呈负相关性，而与FSH、P水平均呈正相关性。研究^［17］表明，miRNA参与了PCOS中胰岛素抵抗的病理生理学过程。另有研究^［18］报道，血清miRNA表达与E₂、P等性激素水平具有一定的相关性。覃舒婷等^［19］研究指出，血清miR-206表达与雌激素受体表达呈负相关。miR-206对人卵巢颗粒细胞增殖与凋亡具有一定的调节作用，其低表达可促进PCOS发生发展^［20］，同时其表达上调对促进胰岛素信号改善具有一定作用^［21］，因此，血清miR-206表达有可能通过上述路径而对PCOS患者下丘脑-垂体-性腺轴内分泌相关指标产生调节作用，影响LH、E₂、T、PRL、FSH、P分泌与释放。

综上所述，PCOS患者血清miR-206表达明显下降，且与LH、E₂、T、PRL、FSH、P水平存在一定关系，临床中可通过干扰miR表达调节下丘脑-垂体-性腺轴内分泌状态与功能，此为PCOS治疗方案的研究提供了新思路。但本研究具有一定的局限性，miR-206参与PCOS发生与发展的具体机制尚不明确，后续需进一步深入探索分析。