摘要:目的建立一种操作简便、重复性较好的大鼠肾脏足细胞分离和培养方法 ,并观察体外培养足细胞的生长特性。方法选用SD大鼠幼鼠,无菌取肾,采用低浓度胰蛋白酶短时间消化结合差异过筛法,获得较高纯度的肾小球,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃、5%CO2的恒温恒湿培养箱培养。采用细胞免疫组化技术,对所提取的细胞进行免疫染色鉴定,并在光学显微镜下对足细胞进行跟踪观察。结果培养第3天,可见有部分细胞从贴壁的肾小球爬出,第5天可见细胞成铺路石样生长,待第8天细胞汇合度达70%~80%,消化细胞传代培养,采用传代培养7 d的细胞进行免疫组化检测,细胞内足细胞标志蛋白Nephrin呈阳性表达,足细胞纯度高迏95%以上。足细胞生长良好,继续培养分化形成具有特殊形态的成熟足细胞。结论本实验成功建立了大鼠足细胞的提取、培养和鉴定方法,操作简单、重复性好、纯度高,为下一步足细胞相关研究奠定了基础。
