DAB2IP表达载体的构建及其对前列腺癌细胞LNCaP DNA合成及凋亡的影响

摘要:

目的构建表达载体pEGFP-N1-DAB2IP,观察DAB2IP在前列腺癌细胞LNCaP中高表达后对细胞凋亡及DNA合成的影响。方法 PCR扩增DAB2IP基因全长,经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切后T4 DNA连接酶连接,DH5α转化,用酶切及测序签定来确定构建的质粒正确。用对照载体pEGFP-N1和pEGFP-N1-DAB2IP转染前列腺癌细胞LNCaP,荧光显微镜下观察转染效率,Western blot检测DAB2IP蛋白的表达,应用BrdU/PI掺入法检测DAB2IP对细胞DNA合成的影响,应用AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测两组细胞凋亡情况。结果 pEGFP-N1-DAB2IP表达载体经酶切和测序鉴定正确,并成功转染LNCaP细胞,Western blot显示转染后DAB2IP的蛋白表达水平明显升高。BrdU/PI掺入法检测:pEGFP-N1组BrdU+细胞比例:0.66±6%,pEGFP-N1-DAB2IP组BrdU+细胞比例:0.45±3%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05),提示DAB2IP能抑制LNCaP细胞的DNA合成。细胞凋亡检测:pEGFP-N1组凋亡细胞比例:7.44±0.68%,pEGFP-N1-DAB2IP组:17.98±1.5%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05),提示DAB2IP能诱导前列腺癌细胞LNCaP的凋亡。结论成功构建了表达载体pEGFP-N1-DAB2IP,并在前列腺癌细胞LNCaP中成功高表达DAB2IP,DAB2IP高表达后能抑制LNCaP DNA合成并诱导细胞的凋亡。

Abstract: