摘要:目的构建肌动蛋白的体外聚合-解离反应体系,探讨α辅肌动蛋白浓度对该平衡体系的影响。方法采用改良的Sobieszek-Bremel法和Katalin Pinter法,从人骨骼肌中分别提取α辅肌动蛋白和G肌动蛋白,构建G肌动蛋白/F肌动蛋白/交联态肌动蛋白的聚合-解离反应体系,施加不同浓度的α辅肌动蛋白,并采用SDS-PAGE电泳与荧光显影法检测反应缓冲液中三种肌动蛋白含量的变化。结果本方法可制备高纯度的α辅肌动蛋白与G肌动蛋白;当α辅肌动蛋白浓度处于0～0.40g/L时,交联态肌动蛋白含量随着前者浓度升高而增多,而当前者浓度处于0.40～0.70g/L时,交联态肌动蛋白含量进入平台期;在该反应体系内,F肌动蛋白/G肌动蛋白浓度比值处于0.45～0.59区间。结论在一定范围条件下,适当增加α辅肌动蛋白可以促进F肌动蛋白交联反应,但F肌动蛋白/G肌动蛋白比值基本维持不变。
